超濾離心管是一種利用離心力驅(qū)動中小體積溶液通過超濾膜,進(jìn)行快速濃縮、滲濾和緩沖液置換的裝置。 它由蓋子、過濾裝置和離心管組成。當(dāng)離心力驅(qū)動溶液在濾膜表面流動時(shí),鹽分、引物、EDTA、污染物等小分子量溶質(zhì)及溶劑在離心力作用下穿透濾膜濾出,而蛋白質(zhì)、核酸、外泌體及細(xì)微粒子等目標(biāo)組分則被截留下來并被收集,實(shí)現(xiàn)樣品中不同組分分離的。由于超濾離心管可重復(fù)性好,樣品回收率高;所需工作條件溫和可控,有利于保持生物組分的生理活性。因此,超濾離心管處理法在蛋白樣品脫鹽、濃縮和緩沖液更換,高品質(zhì)核酸模板的制備等實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)得到廣泛應(yīng)用。
超濾離心管由超濾膜過濾器和離心管兩部分組成。過濾器上部為圓柱型儲液區(qū)。中部為扁平、呈V型過濾區(qū),核心是雙排垂直濾膜。下部為封閉的濃縮液收集槽。工作時(shí),溶液沿著與濾膜表面平行方向(切向)流動,溶劑連同可濾除的小分子組分從濾膜滲出并被甩入離心管底成為濾出液。被濾膜截留的樣品組分則隨切向液流進(jìn)入濃縮液槽。當(dāng)目標(biāo)分子明顯小于濾膜孔徑時(shí),可使用超濾離心管對大分子污染物進(jìn)行除熱源、澄清和分離。目標(biāo)樣品會透過濾膜并保留在離心管內(nèi)。反之,如果目標(biāo)分子遠(yuǎn)大于膜孔徑,則小分子污染物將被濾除,目標(biāo)分子將集中在過濾裝置中。
選擇超濾離心管時(shí)需要考慮一下幾點(diǎn):
1、截留分子量
影響截留和產(chǎn)物回收率的因素有很多,如分子構(gòu)象、帶電特性、樣品濃度、操作條件等。一般建議選擇截留分子量(MWCO)比要濃縮的目標(biāo)大分子的分子量小2-3倍的超濾膜。
2、管身材質(zhì)
超濾離心管的管身材質(zhì)通常為聚丙烯或聚乙烯。這兩種材質(zhì)具有較高的化學(xué)穩(wěn)定性,可以適應(yīng)大多數(shù)樣品。
3、蓋子材質(zhì)
蓋子的材質(zhì)通常與管身的材質(zhì)相同,也是聚丙烯或聚乙烯。
4、容量
超濾離心管的容量通常分為15ml、50ml、100ml、250ml等多種規(guī)格,根據(jù)實(shí)際需要選擇合適的容量。